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胸腺五肽對(duì)嚴(yán)重?zé)齻∪嗣庖哒{(diào)節(jié)作用的研究
- 來(lái)源： 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志 作者：百濟(jì)動(dòng)態(tài) 瀏覽： 發(fā)布時(shí)間：2007/8/10 11:08:00
胸腺五肽對(duì)嚴(yán)重?zé)齻∪嗣庖哒{(diào)節(jié)作用的研究
蔣春曉，張馨木，張贏予，常淑芳
(吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林長(zhǎng)春)
【摘要】：目的 研究胸腺五肽(Thymopentin，TP-5)對(duì)燒傷病人T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的影響。方法 對(duì)燒傷患者進(jìn)行雙盲隨機(jī)對(duì)照臨床研究。檢測(cè)治療組(20例)和對(duì)照組(20例)病人傷后第2、5、10、17、22天外周血T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞，治療組病人從傷后第2天起接受TP-5治療，1- d，肌肉注射，療程20 d；對(duì)照組不給予TP-5。結(jié)果 燒傷后第2天二組病人T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞無(wú)顯著性差異(P>0．05)；燒傷5、10、17、22天后二組病人T淋巴細(xì)胞總數(shù)差異顯著(P<0．05)，對(duì)照組CD8 細(xì)胞顯著高于治療組(P<0．01)，對(duì)照組CD4+／CD8+ ；比值顯著低于治療組(P<0．01)；治療組NK細(xì)胞在燒傷5、10、17、22天后均高于對(duì)照組(P<0．05)。結(jié)論 胸腺五肽可作為一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑明顯提高和改善嚴(yán)重?zé)齻糡淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞功能。
【關(guān)鍵詞】：胸腺五肽；燒傷；流式細(xì)胞術(shù)；免疫調(diào)節(jié)
燒傷被世界衛(wèi)生組織確定為世界醫(yī)學(xué)界十大疑難病癥之一。大量研究表明，嚴(yán)重?zé)齻蟛∪说拿庖吖δ芟陆担訲淋巴細(xì)胞免疫功能障礙為主。燒傷后，機(jī)體細(xì)胞免疫功能降低，與全身嚴(yán)重感染和多臟器功能衰竭的發(fā)生和發(fā)展有著密切關(guān)系，而全身嚴(yán)重感染和多臟器功能衰竭的發(fā)生和發(fā)展是導(dǎo)致特重?zé)齻∪怂劳龅膬蓚�(gè)主要原因。因此，采取積極有效的免疫制劑治療特重?zé)齻蔀闊齻委煹闹匾桨浮Ｐ叵傥咫?Thymopentin，Tp-5)是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸殘基片段(精-賴-天冬-纈- 酪)，但保留了胸腺生成素生物學(xué)活性，具有和胸腺提取物胸腺素和胸腺肽相同的生理功能和藥效。為探討胸腺五肽對(duì)特重?zé)齻∪思?xì)胞免疫的影響，筆者采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(FCM)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)經(jīng)TP．5治療的燒傷病人的外周血T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞數(shù)的變化。
1 材料與方法
1．1 臨床資料根據(jù) 1970年全國(guó)燒傷會(huì)議制定的燒傷嚴(yán)重程度分類標(biāo)準(zhǔn)，選擇2004年7月至2004年12月入院治療40例成年嚴(yán)重?zé)齻∪耍瑢⑵潆S機(jī)分為兩組(見(jiàn)表1)。有其他全身性疾病、腫瘤及妊娠期婦女不進(jìn)入本研究，合并有其他部位嚴(yán)重復(fù)合傷者也未入選。
治療組從傷后第2天起接受TP-5(海南中和制藥有限公司生產(chǎn))治療，每日1 rng，肌肉注射，療程20天；對(duì)照組不給予TP-5治療，其余治療兩組病人基本相同。兩組病人分別于傷后第5、10、17、22天抽取外周靜脈血2 ml。
1．2 檢測(cè)試劑與器材 ①三色直標(biāo)單克隆抗體：鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+ (美國(guó)BD公司)；②雙色直標(biāo)單克隆抗體：鼠抗人CD3／CD15+CD56(美國(guó)BD公司)；③FACS Calibur FCM(美國(guó)BD公司)。
1．3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 不同時(shí)間抽取病例外周靜脈血，檢測(cè)單核細(xì)胞中T淋巴細(xì)胞總數(shù)(CD3+)，T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)以及NK細(xì)胞數(shù)。按以下方法進(jìn)行：
1．3．1 取專用試管4支，依次加入Ig /IgG2/IgC3(對(duì)照)、CD3/CD4/CD8三色直標(biāo)單抗體2o 及ED—TA抗凝血100 ul混勻。
1．3．2 置暗處室溫孵育30 min。
1．3．3 每管加溶血素2 ml，充分混勻，準(zhǔn)確暗處放置10 min。
1．3．4 15，000 r/min離心5 min。
1．3．5 棄上清，每管分別加入滌3次。
1．3．6 棄上清，每管加入PBS 5OOul將沉淀懸浮，上機(jī)測(cè)定。
1．3．7 采用BD公司的Cell Quest軟件進(jìn)行測(cè)定和分析，每次獲取104個(gè)細(xì)胞。
1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果 以 ±s表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2 結(jié)果
對(duì)照組和治療組不同時(shí)間外周靜脈血中T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的結(jié)果見(jiàn)表2(略)、表3(略)。
傷后第2天兩組病人T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著性差異(P>0．05)。傷后第5、10、17、22天兩組病人T淋巴細(xì)胞總數(shù)有顯著性差異(P<0．05)，對(duì)照組CD8+細(xì)胞顯著高于治療組，有顯著性差異(P<0．05)，其比值CD4+/CD8+ 顯著低于治療組，第5、10天兩組比值有顯著性差異(P<0．05)，第17、22天兩組比值有極顯著性差異(P<0．01)。
3 討論
大量研究表明，嚴(yán)重?zé)齻蓪?dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，主要以細(xì)胞免疫功能降低為主，T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)功能缺陷，數(shù)量減少，而T淋巴細(xì)胞的減少可影響抗體形成細(xì)胞功能。T淋巴細(xì)胞功能障礙主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞亞群CD8+細(xì)胞增多、CD4+/CD8+比值減少，且在傷后兩周為明顯，呈倒置現(xiàn)象。本研究結(jié)果支持上述論斷。T淋巴細(xì)胞中的CD4+/CD8+比值代表整體的免疫平衡，它們之間有一定比例，以保持適度的免疫應(yīng)答，如果T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，則導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能紊亂。特重?zé)齻骉淋巴細(xì)胞亞群變化的原因較復(fù)雜，主要與以下因素有關(guān)：燒傷后產(chǎn)生的“燒傷毒素”、“血清不明蛋白”是激活機(jī)體產(chǎn)生各種體液因子引起免疫功能低下的重要物質(zhì)【8,10 ；燒傷時(shí)應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體免疫能力下降；延誤復(fù)蘇，可加重?zé)齻霈F(xiàn)的T淋巴細(xì)胞亞群異常；燒傷治療中使用的某些抗菌素可抑制細(xì)胞免疫。在特重?zé)齻呐R床綜合治療中，積極有效的免疫治療是減少并發(fā)癥、進(jìn)一步提高治愈率的有效手段。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者均在尋找一種理想的免疫調(diào)節(jié)劑。TP-5是胸腺生成素Ⅱ第32~36位氨基酸殘基片段，具有胸腺生成素Ⅱ的全部生理功能，即雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能。筆者給予特重?zé)齻∪?1P一5免疫治療后，發(fā)現(xiàn)11P一5具有降低CD8 細(xì)胞數(shù)量，提高T淋巴細(xì)胞的免疫功能，同時(shí)它明顯調(diào)節(jié)CD4+/CD8+比值，使之趨于平衡，使燒傷病人細(xì)胞免疫功能得以恢復(fù)、提高，減少傷后感染及其它并發(fā)癥的發(fā)生率。TP-5免疫調(diào)節(jié)的作用機(jī)理尚無(wú)完全闡明 ，其主要作用是誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化和與成熟T淋巴細(xì)胞特異受體結(jié)合，使胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(CAMP)水平升高介導(dǎo)，從而誘發(fā)一系列胞內(nèi)反應(yīng)，達(dá)到調(diào)節(jié)免疫功能的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)TP-5可通過(guò)激活包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的單核細(xì)胞的蛋白激酶介導(dǎo)細(xì)胞分裂增殖，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能 ；并能通過(guò)阻斷應(yīng)激時(shí)的腎上腺皮質(zhì)激素反應(yīng)調(diào)節(jié)應(yīng)激狀態(tài)下的機(jī)體細(xì)胞免疫功能，使CD4+/CD8+ 比值趨于平衡。
本研究在使用TP-5過(guò)程中能明顯改善和提高特重?zé)齻∪说拿庖吖δ埽椅窗l(fā)現(xiàn)任何毒副作用。筆者認(rèn)為在燒傷病人的治療中，11P一5可作為一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑。
參考文獻(xiàn)：(略)
TAG：胸腺五肽 免疫調(diào)節(jié) 燒傷
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