臨床測定檳榔十三味丸有效成分含量

來源：百濟藥房藥訊作者：百濟動態瀏覽：發布時間：2010/12/14 3:48:00

多糖幾乎存在于所有生物體中，具有能量儲存、防御功能、抗腫瘤作用、免疫促進活性等多方面的生物功能，所以近年來多糖成為天然藥物研究的熱點。檳榔十三味為丸劑（水丸），由檳榔、肉豆蔻、沉香、當歸、木香、草烏（制）、篳撥、紫硇砂、葶藶子、丁香、廣棗、干姜、胡椒等組成，調節“赫依”，安神止痛，用于心悸，失眠，精神失常，游走刺痛等癥。本實驗在研究廣棗多糖組分的基礎上，研究了檳榔十三味丸水溶性多糖組成和含量。關于檳榔十三味丸化學組分的研究尚未見報道。

1 儀器及藥品
HP5890氣相色譜儀，721型分光光度計（上海）。檳榔十三味丸由內蒙古蒙藥制藥廠提供，批號為990102。木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖為上海試劑二廠產品，核糖、阿洛糖、肌醇為進口試劑，其他試劑均為分析純，雙蒸餾水。

2 方法與結果
2.1 多糖的提取及含量測定
2.1.1 水溶性多糖的提取和樣品的制備：稱取粉碎的檳榔十三味丸10.0 g，用三氯甲烷、丙酮抽提除去色素以及有機試劑溶解物，將藥渣風干放入500 mL蒸餾瓶中，加雙蒸餾水300 mL攪拌加熱，溫度控制在70℃～80℃，提取2 h，共提取3次，合并提取液，減壓濃縮至15 mL，加乙醇沉淀，靜置24 h，抽濾，分別用無水乙醇10 mL洗3次，再用丙酮10 mL洗3次，乙醚10 mL洗1次，干燥得白色檳榔十三味丸粗多糖1.35 g。經sp-sephadex C-25陽離子交換樹脂提純得1.15 g多糖。精密稱取恒重檳榔十三味丸多糖0.012 1g，置于100 mL容量瓶中，加入0.5 mol/L H2SO420 mL，加熱水解2 h，冷卻至室溫，稀釋至刻度，待測水溶性多糖含量用。

2.1.2 糖含量的測定：精密稱取葡萄糖對照品100mg，用純水制成0.1 mg/mL的對照品溶液，分別稀釋至10.00，20.00，30.00，40.00，50.00ug/mL 的5個不同濃度的對照品系列溶液，精密吸取1.0 mL置10 mL容量瓶中，加入5 苯酚1.5 mL混勻，加入濃硫酸7.5 mL，加水至刻度，旋渦混合5 min，再放置20 min后，在497 nm 波長處測定A值，求得標準曲線的回歸方程為C=0.186 2A-0.002 774，r=0.999 7。在5～75 Pg葡萄糖質量與吸光度線性關系良好。取待測糖樣品溶液0.2 mL按標準曲線的繪制方法測定A值，由回歸方程計算檳榔十三味丸糖含量為88.4%，其產率為10.16%。

2.1.3 回收率試驗：精密稱取樣品5 mg置于50mL容量瓶中，加入1 mol/L H2SO410 mL。加熱水解2 h，冷卻至室溫，加入一定量葡萄糖對照品溶液，稀釋至刻度，按2.1.2項下方法進行含量測定，結果平均回收率為100.9％，RSD=0.91％（n=5）。

    2.2 水溶性多糖的組分分析
    2.2.1 各種單糖的GC分析：精密稱取木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、核糖、鼠李糖、巖藻糖各2 mg配成1 mg/mL的混合糖液。另分別配制阿洛糖、肌醇的1 mg/mL溶液。量取混合糖液0.2 mL依次加入28％濃氨水0.05 mL、肌醇0.05 mL和阿洛糖0.05 mL混合，量取0.2 mL，依次加入少量乙醇、氨水、四氫硼鈉混合，在40℃水浴加熱1 h，再依次加入冰醋酸10滴、1-甲基咪唑0.5 mL和乙酸酐5.0 mL，放置10 min，冰浴10 min，將溶液用KOH調至強堿性，再冰浴30 min，待分層后取出油層，用氮氣吹干，然后用乙酸乙酯溶解，直接進行氣相色譜分析。
氣相色譜條件：色譜柱為HPX70毛細管柱，檢測器和進樣口溫度均為270℃ ，柱溫為180℃～230℃，9 min的程序升溫，采用峰面積內標法定量（用肌醇和阿洛糖作內標）。單糖的氣相色譜圖見圖1。（略）

    2.2.2 水溶性多糖的組分分析：精密稱取多糖約10.0 mg，加入2 mol/L H2SO4 10 mL水解2 h。取該溶液0.2 mL，按上述色譜條件測定，氣相色譜圖見圖1。將水溶性多糖的單糖組成及其含量列入表1。水溶性多糖中單糖阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖的物質的量比為1.87：0.20：6.10：4.44 ：22.22。

3 討論
    3.1檳榔十三味丸水溶性多糖含量為10.16%，其水溶性多糖由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖等組成，葡萄糖含量較高，有一定的阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖，少量木糖。