HBV DNA的檢驗方法及指標、單位換算

來源：新特藥房藥訊作者：百濟瀏覽：發布時間：2007/3/20 11:02:00

　　目前檢驗病毒的方法，除去血清培養基方法（HIV， CMV， HBV等病毒很難在培養基中分離檢驗），大致有三種:：

　　PCR (polymerase chain reaction 或RT-PCR等)，最常用的方法，很敏感，但誤差大，價錢比較貴，通常單位用 copies/ml of plasma；

　　bDNA (branched chain DNA assay)，也是目前常用的方法，敏感，常規化，結果比較穩定，價錢比較便宜，通常單位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)；

　　NASBA (nucleic acid sequence-based amplification)，不常用，很敏感，誤差大，工時長，價錢最貴，通常單位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)；

　　就HBVDNA而論，目前測驗HBV DNA時通常要達到兩個目的。一個是定性(qualitative)，另外一個是定量(quantitative) 。

　　HBVDNA定性的測驗注重于HBVDNA的存在，它通常可以測到低于100copies/ml的病毒存在。當然還有更精確的方法，通常用于科研實驗室中，可以測到更低的含量。一般臨床用的都可以測到1000-2000 copies/ml以上的精度。定性通常只給陰性、陽性的結果。

　　另外一方面，定量的測定著重于HBV DNA量存在的多少。通常用于定量的極限在0.1-5 pg/ml (1 pg/ml = 283，000 copies/ml)之間。同樣，更精確的儀器可以測到0.001-0.005 pg/ml的精度。國外常用 fg/ml 為單位。copies/ml 比 fg/ml， pg/ml 單位更小。fg/ml， pg/ml 顯示定量比 (?) X 10?易懂不容易錯。

　　關于 copies/ml， pg/ml， fg/ml的換算大致如下:

　　Picogram: 1 pg = 10^-12g= 10^-9mg= 10^-6mg= 10^-3ng= 10³fg

　　Femtogram: 1 fg= 10^-15g= 10^-12mg= 10^-9mg= 10^-6ng= 10^-3pg

　　1 pg/ml = 283，000 copies/ml

　　HBVDNA正常指標

　　HBVDNA的正常指標或標準可以說是"不能100%設定的。"

　　定性測量的陽性通常說明病毒容易傳染給他人，陰性說明不容易傳給他人。一般講血中測到少于1000copies/ml一下可為陰性。

　　定量測驗，因為結果是數字的，而不是"高低，" "陰陽，" "正常/不正常，" 也就比較麻煩。確定正常值指標一定要知道所做實驗的 "參考范圍" (reference range)。參考范圍是因測驗的儀器，方法，試劑，病人年齡，性別，條件等而定的。如，目前一般生產應用的Ultra Sensitive Quantitative PCR (高靈敏度定量PCR) 法的測驗參考范圍是在：

　　Less than 0.001 pg/mL

　　Less than 2.3 log copies/mL

　　Less than 200 copies/mL

　　
Note: The reportable range is 0.001 to approximately 700 pg/mL， which is approximately equivalent to 2.3-8.3 log copies/mL (200 to 200，000，000 copies/ml)。

　　就是說這種方法可以測到參考范圍是在0.001 到 700 pg/ml間，約合在2.3-8.3 log 拷貝/毫升(200-200，000，000 拷貝/毫升)間；但是不同方法，儀器，批量這個范圍不同而正常值(對照)也就不同。現在技術先進，人們可以在大量生產時人為地把這個范圍弄穩定/固定。

　　此外定量是根據拷貝/毫升決定多少而定。它只有量的定性! 只要測得到就是陽性，不是在一個病毒含量濃度沒病，一個含量有病，何況測不到也不能說沒病了 (下面細談)。

　　所以要想知道結果的正確與否，含量高低等應該和所做DNA單位索取所用方法及儀器的參考范圍及標準值或正常對照值。

　　查不到病毒DNA(Undetectable DNA)是不是就說明疾病治愈，不感染了?

　　查不到病毒的DNA不能說明已經不感染疾病，或者是治愈了。查不到病毒可能是因為現有儀器和水平不能測到更精確程度。目前很好的儀器可以測到20copies/ml之低血中的病毒存在。但是就是低于20拷貝還是有病毒存在在那里，而且病毒可能存在除血清以外的液體，細胞等中。病毒變化是以log (10的次方)計算的，半個log變化都屬于輕微的。

　　測驗HBV DNA的一點建議

　　一個有經驗的醫生，第一次給病人測定DNA，用藥或檢查前，都會用兩種不同的方法確定病毒的底線。之后，如果沒有特別誤差，最好是沿用一種方法。這樣可以比較準的記錄病毒量的變化。不會因為今天在地壇做的和下次在協和做的結果看起來離譜 (可能方法，參考范圍，儀器不同)。醫生也是一樣，最好固定。不然每個醫生不同想法 (不過想法一樣就壞了)，最后弄得患者一頭霧水了。當然第二，第三位醫生的會診建議是不可以忽略的。

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