用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法檢測血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA含量，對不同HBV感染狀態(tài)患者血清HBV載量與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平的關(guān)系進行了探討。
　　一、 資料與方法
　　1. 研究對象：134例HBV感染者均為我院住院及門診患者，男78例，女56例，年齡18～65歲，平均年齡（35.9±23.4）歲。其中慢性乙型肝炎（CHB）患者84例（54例HBeAg陽性，30例HBeAg陰性），慢性無癥狀HBV攜帶者（ASC）50例（30例HBeAg陽性，20例HBeAg陰性）。診斷符合2000年病毒性肝炎防治方案[1]。用PCR專用管收集血清，置-28℃保存，統(tǒng)一檢測。
　　2. 方法：(1)HBV DNA定量采用熒光定量PCR方法檢測：純化HBV DNA的不對稱擴增引物及信號擴增引物由美國Biotronics公司提供；dNTP和Taq酶系美國Promega公司產(chǎn)品。不對稱引物1為5′-TGCTCGTGTTACAGGCGGGGT-3′；引物2為5′-GAGGCATAGCAGCAGGATGAAGAG-3′，擴增產(chǎn)物為HBV S基因區(qū)編碼的241bp片段；信號擴增引物為5′-TCGCTGGAAGTGTCTGCGGCGT-3′，不對稱擴增產(chǎn)物內(nèi)長度為64bp片段。(2)HBV血清標(biāo)志物檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法測定。(3)ALT測定采用全自動生化分析儀。
　　二、結(jié)果
　　1. 134例慢性HBV感染者的血清病毒載量：隨著HBV感染的進展，HBV載量逐漸下降。HBeAg陽性的ASC患者血清病毒載量最高（109.66±4.3拷貝/ml），其次為HBeAg陽性的CHB患者（107.63±3.6拷貝/ml）、HBeAg陰性的CHB患者（105.45±2.5拷貝/ml），而HBeAg陰性的ASC病毒載量最低（103.86±2.3拷貝/ml）。在HBeAg陰性感染者中，肝炎患者的血清病毒載量顯著高于無肝炎者（106.45±2.3拷貝/ml對104.87±4.6拷貝/ml，t＝13.1，P＜0.01）。90.0%（18/20）的HBeAg陰性ASC血清HBV載量低于105拷貝/ml。
　　2. 54例HBeAg陽性CHB患者的血清HBV載量、ALT水平及HBeAg半定量值：每月1次，連續(xù)觀察2年以上。70.4%（38/54）患者血清病毒載量相對穩(wěn)定，29.6%（16/54）患者病毒載量出現(xiàn)明顯波動，與ALT波動不完全一致。有20.4%（11/54）的患者在觀察過程中出現(xiàn)ALT明顯升高（高于基線4倍以上），之后1～2個月血清病毒載量明顯下降，3個月后病毒含量又逐漸上升到原來水平。有1例患者在觀察第5個月出現(xiàn)ALT顯著升高（大于1000U/L），之后HBV DNA水平明顯下降，1個月后HBV DNA水平低于105拷貝/ml，2個月后ALT復(fù)常，隨訪半年后ALT正常，HBV DNA及HBeAg陰轉(zhuǎn)。相關(guān)分析表明，HBeAg陽性的患者HBV DNA含量與ALT無明顯相關(guān),與HBeAg（P/N值）呈正相關(guān)（r＝0.45，P<0.05）。 
　　3. 30例HBeAg陰性感染者血清HBV載量與ALT水平顯著正相關(guān)（r＝0.76，P<0.01），ALT升高時有80.0%（24/30）的患者血清HBV載量大于107拷貝/ml。
　　三、討論
　　通過對HBV感染不同階段的血清HBV載量進行分析，結(jié)果表明HBeAg陽性的ASC血清病毒載量最高，其次為HBeAg陽性的CHB患者、HBeAg陰性的CHB患者，而HBeAg陰性的ASC病毒載量最低。血清HBV載量與HBeAg（P/N）值呈正相關(guān)。動態(tài)觀察患者血清病毒載量、ALT水平變化發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)CHB患者血清病毒載量水平相對穩(wěn)定，有時會出現(xiàn)波動，但與ALT水平波動不一致，部分患者ALT升高后HBV DNA水平有一過性下降，可能與機體免疫反應(yīng)清除病毒有關(guān)。HBeAg陰性CHB患者的血清病毒載量與ALT水平有一定的關(guān)系[2]，而HBeAg陽性的患者HBV DNA含量與ALT無明顯相關(guān)。  
 

TAG：慢性乙型肝炎病毒